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                                                                                                    規(guī)格：100 管/48 樣

土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說明書

微量法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內活性微生物量以及其對 有機物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標。

測定原理：

氫受體 2, 3, 5 -  氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細胞呼 吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF)，TF  呈現(xiàn)紅色，在波 長 485nm 處有最大吸收峰，采用分光光度法于 485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品：

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比 色皿/96  孔板、冰、蒸餾水、丙酮 (不允許快遞，請用戶自備)。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1  瓶，使用前加 5mL  水溶解，4℃避光保存 (盡量現(xiàn)配現(xiàn)用)。 試劑二：液體 20mL×1  瓶，4℃保存。

試劑三：丙酮， 自備。

樣品處理：

1.  土壤樣品：準確稱取過 40  目篩的新鮮土壤樣品約 0. 1g(以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸)。

2.  污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌，10000g ，25℃ ，離心 10min ，棄上清，反復 3-4 次。 測定步驟和操作表：

1 、分光光度計/酶標儀預熱 0min ，調節(jié)波長至 485nm。

2 、操作表

對照管測定管

樣品 (g)0.050.05

試劑一 (mL)0.1

試劑二 (mL)0.20.1

置于 EP  管中，充分混勻，37℃ ，暗培養(yǎng) 6h ，取出后立即冰浴 5min

試劑三 (mL)0.10.1

反復震蕩數(shù)次，37℃保溫 10min ，10000g ，4℃ ，離心 5min ，取 200μL  上清于微量石英比色 皿/96  孔板，對照管調零，測定 A 485  。

脫氫酶活力計算：

酶活單位定義：

在 37℃時，每克樣品每小時使反應體系 OD  值每增加 0.01 為一個酶活單位。 計算公式：脫氫酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T ：培養(yǎng)時間，h；W：樣品質量，g

注意事項：

1.  配制好的試劑一避光保存于 4℃ ，最好在一周內使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。

2.  試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請穿實驗服，戴口罩，戴乳膠手套操作。

3.  反應完成后立即冰浴以終止反應，并去除干凈殘留的反應液。

4.  如果測定出來的吸光值較大，減少樣品用量再進行測定。

5.  試劑盒 2-8℃保存。

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